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    大鼠睪酮（T）elisa試劑盒原理和說明書

    大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理操作注意事項

    1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

    2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

    3.濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；預處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。

    4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

    5.所有液體組分使用前充分搖勻。

    試劑盒組成

    名稱96孔配置48孔配置備注

    微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無

    標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無

    生物素1mL0.5mL無

    檢測抗體-HRP10mL5mL無

    20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

    底物A6mL3mL無

    底物B6mL3mL無

    終止液6mL3mL無

    封板膜2張2張無

    說明書1份1份無

    自封袋1個1個無

    注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、20、40、80、160、320pg/mL

    試劑的準備

    20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩

    沖液加19份的蒸餾水。

    洗板方法

    1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

    2.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

    大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理操作步驟

    1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

    3.待測樣本孔先加生物素10μL，再加待測樣本50μL；

    4.隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

    6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

    7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

    結果判斷

    繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

    大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理試劑盒性能

    1.準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900。

    2.靈敏度：檢測濃度小于1.0pg/mL。

    3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

    4.重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于15%。

    5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司